尿蛋白定量测试盒检测原理

尿蛋白定量测试盒检测原理

一、测定原理：

  在酸性介质中，CBB 与蛋白质的 NH3+基团结合引起由棕色到兰色的颜色变化，在 595nm 处有最大吸收峰。

二、试剂组成：（试剂盒有效期 6 个月）

试剂一：CBB 试剂 60mL×1 瓶， 4℃保存。用时按 CBB 试剂：蒸馏水=1∶4 比例(即 5 倍稀释)配制成 CBB 应 用液，现用现配。 

试剂二：524mg/L 蛋白标准液 0.5mL×1 支，4℃可保存 1 个月（-20℃冷冻保存，可存放 6 个月）。 

三、所需仪器及试剂： 

可见光分光光度计及 1cm 光径比色皿（或酶标仪（595nm）及 96 孔板），涡旋混匀器，蒸馏水。

四、操作方法：

五、计算公式：

六、注意点： 

1、样本蛋白浓度过低时可适当加大取样量（如取样 0.1 或 0.2mL，同时标准品应稀释 2 倍或 4 倍后和样本量体 积一致，计算时标准品浓度除以相应的稀释倍数后再代入计算），而 CBB 应用液量不变； 

2、测定管 OD 值过高时（测定 OD 减去空白 OD 后的差值比标准 OD 减空白 OD 的差值的 2 倍还大的）要将样 本用生理盐水作一定稀释后（稀释后选择测定 OD 值接近标准 OD 值对应的稀释倍数）再测； 

3、本试剂盒也可用酶标仪来读数（如在反应液静置 5 分钟后从每管中各取 0.2mL 到 96 孔板中（注意不要加入 气泡），595nm 处读数），计算公式不变。

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